蛋白層析柱裝柱方法詳解，你還為它而發(fā)愁嗎

 

蛋白層析柱裝柱方法：

（1）裝柱前要仔細(xì)看填料的使用說明書，每種填料都有自己的特性，以及特殊的裝柱方法，針對不同的空柱，也要注意方法可能不同，這一點非常重要：裝柱包括以后使用中不允許柱內(nèi)進入氣泡（bubblefree），柱頭事先也要排除氣泡。  

（2）填料要加水?dāng)嚢璩删鶆驊乙海瑧乙簼舛纫捞盍隙煌话?0－85%，迅速倒入空柱內(nèi)，或吸或壓，流速和具體步驟看說明書。  

（3）所有柱子盡量做到填料均勻，尤其是用于凝膠層析的柱子。裝柱完成后，可用柱效測定的方法檢查裝填效果。一個裝填合格的柱子的理論塔板高度應(yīng)是填料平均粒徑的2－4倍，在此范圍內(nèi)越小越好。  

（4）選擇合適的泵，盡量流速滿足要求，脈沖盡量小。選柱塞泵。  

（5）準(zhǔn)備上柱的液體應(yīng)進行過濾，至少是0.45micrometre。  

（6）關(guān)于純化，首先要考慮的是你的目標(biāo)：純度、數(shù)量、速度、收率等等，再根據(jù)樣品的具體情況，尤其是目標(biāo)蛋白的性質(zhì)，確定純化策略。

（7）至于蛋白層析柱測序，大概不到1mg應(yīng)該足夠了。